Cómo calcular el número de moléculas

Cantidad de moleculas:

Es el temido tema, ¿verdad? Calcular el número de moléculas, la concentración de una solución o calcular diluciones en serie fueron tareas que siempre me llenaron de terror cuando estudiaba. ¡Y hasta el día de hoy todavía no soy un gran fanático! No temas, ¡hay luz al final del túnel!

En este artículo, nos gustaría calcular el número de moléculas en una concentración de ADN, por ejemplo, ¿cuántas plantillas / copias de un fragmento de 50 pb tiene en 500 ng?

Serás un genio en estos cálculos en muy poco tiempo 🙂

Esta información puede ser útil al hacer las siguientes aplicaciones:
Ligaciones de ADN
Ensayos bioquímicos
PCR en tiempo real (cuantificación absoluta)
Medición de carga viral / genomas virales
Cualquiera que sea su necesidad de esta información, puede ir paso a paso.

Aquí viene el bit de la ciencia y algunos puntos clave para recordar
El peso promedio de un solo par base de ADN (pb) es de 650 daltons. Esto también se puede escribir como 650 g / mol (= masa molar)
Esto es lo mismo que una mole de un peso de 650 g
El peso molecular se puede multiplicar multiplicando su longitud
Veamos un ejemplo:
Pregunta: ¿Cuál es el peso molecular de un plásmido de 5.2 kb? Recuerde 5.2 kb = 5.200 pb

Cálculo: 5,200 bp x 650 daltons = 3,380,000 daltons oro g / mol

Ahora sabemos cómo calcular el peso molecular de una plantilla de ADN. Usando el número de Avogadro, que es 6.022 × 1023 moléculas / mol, el número de moléculas de la plantilla se puede calcular con la siguiente fórmula:

# de copias de ADN fig 1
ng es la cantidad de ADN (plásmido, imprimador, etc.) que tiene en nanogramos
6.022 × 1023 = número de Avogadro
es la longitud de su fragmento de ADN en pares de bases. Simplemente multiplique por 1000 si está trabajando en kb.
Multiplicamos por 1 × 109 para convertir a nanogramos
Nota: el número de Avogadro o constante (denotado como L, NA) se define como el número de partículas (generalmente átomos o moléculas) por mol de una sustancia

Ahora probemos la fórmula usando algunos ejemplos
Ejemplo 1: Plásmido
Pregunta: Tienes 300 ng de un plásmido de 5.2 kb.

¿Cuántas copias de tu plásmido tienes?

Cálculo: Número de copias = (300 * 6.022 × 1023) / (5,200 * 1 × 109 * 650)

Ejemplo 2: Primer
Pregunta: Tienes 50 ng de una imprimación de 20 pb.

¿Cuántas copias de tu imprimación tienes?

Cálculo: Número de copias = (50 * 6.022 × 1023) / (20 * 1 × 109 * 650)

Ejemplo 3: producto de PCR
Pregunta: Usted tiene 150 ng de un producto de PCR purificado de 670 pb.

¿Cuántas copias de su producto de PCR tiene?

Cálculo: Número de copias = (150 * 6.022 × 1023) / (670 * 1 × 109 * 650)

Nota: Es importante recordar que esta fórmula se basa en una sola especie de ADN, por lo tanto, cuando se aplica a productos de PCR o plásmidos, asegúrese de que solo tenga una banda o un miniprep limpio de plásmido.

Ves, eso no fue tan malo después de todo. Una vez que conozca la longitud de su fragmento de ADN y la concentración en nanogramos, puede aplicar fácilmente la fórmula para obtener el número de copias en cualquier tipo de muestra de ADN.

Feliz cálculo y no dude en ponerse en contacto con los comentarios, consultas o sugerencias